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細(xì)胞計數(shù)的方法和原理主要是哪些呢?

  • 發(fā)布日期:2022-01-11      瀏覽次數(shù):1645
    •   細(xì)胞計數(shù)是細(xì)胞實驗中非常重要的一個環(huán)節(jié),科研工作者需要從多方面對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分析,比如活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞存活率等。經(jīng)典的通過臺盼藍(lán)染色方法對細(xì)胞進(jìn)行人工計數(shù),是我們研究細(xì)胞常備技能之一。隨著科技發(fā)展,自動化的細(xì)胞計數(shù)儀應(yīng)運(yùn)而生,它以便捷、快速等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用到細(xì)胞實驗中。
        細(xì)胞計數(shù)的方法和原理主要是哪些呢?
        1.手工顯微鏡法
        又稱血球計數(shù)板法,是原始的細(xì)胞計數(shù)方法,顯微鏡下調(diào)整不同放大倍數(shù)的物鏡,通過染色的方法人工觀察細(xì)胞狀態(tài)判斷細(xì)胞死活,進(jìn)行計數(shù)。通過檢測出一定體積的均勻細(xì)胞懸液中的細(xì)胞個數(shù)(對一定數(shù)量的小格或中格計數(shù),根據(jù)相應(yīng)的小/中格所占的體積,可以推算出單位體積的溶液中微生物細(xì)胞的密度或總數(shù)),換算出每毫升的細(xì)胞個數(shù),從而得到細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度。實驗過程中采用五點取樣法,即一般隨計數(shù)室四角上的四個中方格以及正中間的一個中方格進(jìn)行統(tǒng)計(對于壓線的,采取數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右的原則)。這種方法數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞,若細(xì)胞聚集成團(tuán)時,按照1個細(xì)胞計算。
        2.庫爾特原理又稱電阻抗檢測原理。細(xì)胞是相對不良導(dǎo)體,當(dāng)細(xì)胞懸浮電解質(zhì)中,將小孔管插入細(xì)胞懸液,使其管內(nèi)充滿稀釋液,位于小孔管兩側(cè)電極產(chǎn)生穩(wěn)定電流。當(dāng)一個細(xì)胞通過小孔時,瞬間引起電壓變化出現(xiàn)一個脈沖信號,細(xì)胞體積越大,引起脈沖越大,產(chǎn)生脈沖振幅越高,脈沖信號由下列步驟完成:①放大;②閾值調(diào)節(jié);③甄別;④計數(shù)。采用這種計數(shù)原理的儀器具代表性的是CASY細(xì)胞計數(shù)儀,這種原理的儀器內(nèi)置液路系統(tǒng),需要定期清洗管路防止堵塞。
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